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技術專題

那些年,我們用過的磁珠

分子診斷是以核酸作為檢測對象,主要應用于臨床各科的診斷中,如腫瘤、感染、遺傳等各方面,而核酸提取是分子診斷實驗的“第一步”。 通過對磁珠進行一定的包被(如硅基、氨基、羧基等),從而可以實現(xiàn)對核酸的高通量、自動化提取,這一技術產(chǎn)生于20世紀80年代,已經(jīng)有了成熟的試劑盒并形成為產(chǎn)業(yè)。

分子診斷實驗的第一步:磁珠法提取核酸
分子診斷是以核酸作為檢測對象,主要應用于臨床各科的診斷中,如腫瘤、感染、遺傳等各方面,而核酸提取是分子診斷實驗的“第一步”。
通過對磁珠進行一定的包被(如硅基、氨基、羧基等),從而可以實現(xiàn)對核酸的高通量、自動化提取,這一技術產(chǎn)生于20世紀80年代,已經(jīng)有了成熟的試劑盒并形成為產(chǎn)業(yè)。

磁珠法提取核酸的原理及步驟

核酸結(jié)合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。細胞或組織在裂解液作用下,其中的DNA/RNA被釋放出來。此時經(jīng)過表面修飾的超順磁性氧化硅納米磁珠即與核酸進行“特異性結(jié)合”,形成“核酸-磁珠復合物”。
然后在外加磁場的作用下,復合物即分離出來。最后經(jīng)過洗脫液洗去非特異性吸附的雜志、去鹽、純化后,即得到欲提取的核酸物質(zhì)。

傳統(tǒng)核酸提取法與磁珠法比較

隨著基因檢測、個性化給藥、產(chǎn)前診斷等的普及,在生物行業(yè)各領域都追求高通量、自動化的今天,傳統(tǒng)DNA提取方法的局限愈來愈明顯,而磁珠法DNA提取的優(yōu)勢則愈來愈明顯:能夠?qū)崿F(xiàn)自動化、大批量操作;操作簡單、用時短;不使用傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒試劑,安全無毒完全符合現(xiàn)代環(huán)保理念;與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度大。

磁珠法提取核酸的應用范圍

廣泛應用于分子生物學中的基因組研究、分子進化研究、醫(yī)學中遺傳病的研究、突變基因的檢測、腫瘤的篩查、HPV等的檢測、HLA分型、移植配型等、法醫(yī)學生物樣本血斑、精斑、頭發(fā)、煙蒂等現(xiàn)場證物的檢測、和司法上的親子鑒定、血緣關系的鑒定等提供證據(jù)、考古學、大中小學的生物試驗等許多領域。

那些生產(chǎn)提取核酸用磁珠的廠家

常用的磁珠法DNA提取試劑盒,目前主要為國外產(chǎn)品,例如Promega, Roche, DynaBeads,Qiagen等,且大多需要與專用儀器配套使用。
國內(nèi)將磁珠應用于核酸提取的研究起源于2002年左右,經(jīng)過近些年的反復試驗,形成了穩(wěn)定的核酸提取體系,并已被用于一些疾?。ㄈ缫腋巍⒈?、結(jié)核菌等)定量檢測。國內(nèi)的產(chǎn)品主要有:海貍納米、洛陽惠爾納米、天根等。

免疫磁珠引領分離技術的一次革命


免疫磁珠,是發(fā)展起來的一項新的免疫學技術,它將固化試劑特有的優(yōu)點與免疫學反應的高度特異性結(jié)合于一體,以免疫學為基礎,滲透到病理、生理、藥理、微生物、生化以及分子遺傳學等各個領域,其在免疫檢測、細胞分離、生物大分子純化和分子生物學等方面得到了越來越廣泛的應用。
利用人工合成的內(nèi)含鐵成分,可被磁鐵磁力所吸引,外有功能基團,可結(jié)合活性蛋白質(zhì)(抗體)的磁珠,作為抗體的載體。當吸附在磁珠上的抗體與相應的微生物或特異性抗原物質(zhì)結(jié)合后,則形成“抗原-抗體-磁珠免疫復合物”,這種復合物具有較高的磁響應性,在磁鐵磁力的作用下定向移動,使復合物與其他物質(zhì)分離,而達到分離、濃縮、純化微生物或特異性抗原物質(zhì)的目的。

免疫磁珠純化與抗體層析純化比較



應用抗體(蛋白)包被的免疫磁珠純化技術無需復雜的層析設備,對樣品的澄清度無限制,只需要簡單的磁性吸附步驟即可很方便地從單抗表達產(chǎn)物中分離單抗,有效解決了傳統(tǒng)層析技術的不足之處。
另外,免疫磁珠技術區(qū)別于PCR技術和流式細胞技術的優(yōu)勢在于它可以保證被分離靶細胞的形態(tài)和功能的完整。免疫磁珠技術同時還具有靈敏度高、特異性高、檢測速度快、重復性好、操作簡單和不需要昂貴的儀器設備等優(yōu)點。

 

免疫磁珠的應用范圍

免疫磁珠是由John Ugelstar等在1979年首先制備出,是磁珠免疫微球的一種,為包被有單克隆抗體的球型磁性微粒,可特異性地與靶物質(zhì)結(jié)合使之具有磁響應性,從此被廣泛地應用于醫(yī)學衛(wèi)生領域的許多方面,并由此引發(fā)了生物分離技術上的一次革命。其主要被應用在細胞分選(MACS)、免疫檢測和疾病診斷(細胞因子檢測、無創(chuàng)產(chǎn)前診斷)、癌癥治療、食品及環(huán)境中微生物檢測等方面。

那些生產(chǎn)免疫磁珠的廠家


研究人員往往會基于特定的細胞因子選擇“多路復用試劑盒”,盡管許多公司出售的試劑盒提供的面板很大。但有些公司可以提供小面板試劑盒的定制工作,幫助研究人員縮小他們想了解的免疫反應、疾病或治療相關的細胞因子范圍。


磁珠助力液體活檢
外周血游離 DNA, 片段長度通常小于 1kb,如血液中的腫瘤胞外 DNA片段或母體外周血血漿或血清中的胎兒游離 DNA。游離DNA片段可以提供某些癌癥和疾病確診的生物學標志物,在生物體液如血漿、血清、尿液中,游離DNA片段的濃度通常很低,且不同個體之間的差異很大。

游離 DNA的檢測中如何使用磁珠?

在這外周血游離 DNA的檢測過程中,BeaverBeadsTM Circulating DNA Kit 是專門針對 200μl-5ml 血漿、血清等樣本中游離 DNA的提取純化試劑盒,其含有專用的磁珠和特殊配方的緩沖體系,洗脫體積可低至20μl。

 

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