蛋白純化——His標(biāo)簽與GST標(biāo)簽知多少？
His與GST標(biāo)簽特點(diǎn)，了解一下
海貍蛋白純化磁珠試用活動(dòng)正在如火如荼進(jìn)行中，在標(biāo)簽蛋白純化過程中，合適的標(biāo)簽不但有利于蛋白的純化，促進(jìn)蛋白的可溶性，同時(shí)也不能影響蛋白的結(jié)構(gòu)功能和下游應(yīng)用。小編今天和大家聊一聊主要的標(biāo)簽蛋白——HIS與GST標(biāo)簽特點(diǎn)。
HIS-Tag（組氨酸標(biāo)簽）
HIS-Tag 由6-10 個(gè)組氨酸殘基組成，分子量不到0.84KD，通常插入在目的蛋白的C 末端或N 末端。HIS-Tag是目前原核表達(dá)最常用的標(biāo)簽，蛋白純化完之后可以不需切除此標(biāo)簽，也不會(huì)對(duì)蛋白產(chǎn)生功能影響。同時(shí)，蛋白純化步驟簡便，純化條件溫和，對(duì)蛋白也不會(huì)產(chǎn)生太大影響。HIS-Tag 蛋白純化的首選標(biāo)簽。
HIS-Tag 本身的特性對(duì)目的蛋白沒有影響，不會(huì)形成二聚體；
分子量較小，只有0.84KD，對(duì)蛋白的下游應(yīng)用不會(huì)產(chǎn)生影響；
免疫原性低，可將純化的蛋白直接注射動(dòng)物進(jìn)行免疫并制備抗體；
HIS-Tag 與細(xì)菌的轉(zhuǎn)錄翻譯機(jī)制兼容，有利于蛋白表達(dá)；
可與其他標(biāo)簽構(gòu)建雙標(biāo)簽表達(dá)，可用于多種蛋白表達(dá)系統(tǒng)，純化條件溫和對(duì)蛋白影響較小。
海貍His-tag蛋白純化磁珠以磁性瓊脂糖微球?yàn)榛|(zhì)，活化偶聯(lián)亞氨基二乙酸（IDA）,分別螯合鎳離子（Nickel）、鈷離子（Cobalt）兩種金屬離子，組氨酸殘基側(cè)鏈與金屬離子（鎳/鈷離子）有強(qiáng)烈吸引力，可通過磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標(biāo)蛋白，海貍HIS-Tag蛋白純化磁珠純化蛋白純度高于85%。
GST-Tag 相對(duì)分子質(zhì)量較大，約為26KD，插入在目的蛋白的C 末端或N 末端，大腸桿菌中常用在N 端。GST(谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶) 蛋白本身是一個(gè)在解毒過程中起到重要作用的轉(zhuǎn)移酶。一般選擇GST 標(biāo)簽的目的有兩個(gè)，一是提高蛋白表達(dá)的可溶性，二是提高蛋白的表達(dá)量。蛋白表達(dá)純化結(jié)束后需根據(jù)不同的蛋白應(yīng)用而確定是否切除標(biāo)簽，標(biāo)簽較大，切除與否需根據(jù)下游應(yīng)用考慮。如果要去除GST 融合部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。檢測方法可用GST 抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測。
增加外源蛋白的可溶性；
可在不同的宿主中表達(dá)，適用范圍廣；
可用不同的蛋白酶可以方便去除；
很好保留了蛋白的抗原性和生物活性，提高外原蛋白的穩(wěn)定性；
高特異性，純化方便且溫和；
分子量較大，可能會(huì)影響蛋白質(zhì)的功能和下游實(shí)驗(yàn)；
如果蛋白不可溶，很難用變性的方法純化。
海貍GST融合蛋白純化磁珠，通過磁珠偶聯(lián)谷胱甘肽(GSH)，利用谷胱甘肽與谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶之間酶和底物的特異性作用力，分離出帶有GST標(biāo)簽的蛋白，純化蛋白的純度達(dá)到90%。
海貍磁珠法蛋白純化
無需對(duì)粗蛋白樣品進(jìn)行復(fù)雜預(yù)處理
無需要昂貴的層析設(shè)備
節(jié)省時(shí)間，降低成本
1h內(nèi)獲得高純度蛋白
輕松實(shí)現(xiàn)高通量、大規(guī)模蛋白純化
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